وب هکس

میکروبیولوژی 88 لاهیجان - سرولوژی( تست الیزا)
میکروبیولوژی 88 لاهیجان
صفحه نخست       پست الکترونیک          تماس با ما              ATOM            آپدیت روزانه nod32
گروه طراحی قالب من گروه طراحی قالب من گروه طراحی قالب من گروه طراحی قالب من گروه طراحی قالب من




درباره وبلاگ


به یاد ورودی های 88 لاهیجان ♥

مدیر وبلاگ : مصطفی
نویسندگان
نظرسنجی
نظرتون راجع به این وب چیه؟










تعداد بازدید :

انواع روشهای الایزا

بعد از مقدمه‌ای كه در قسمت قبل شرح داده شد به انواع روشهای الایزا می‌پردازیم.

 امروزه بر حسب اینكه :

الف) ماهیت آنتی‌ژن یا آنتی‌بادی مورد سنجش چگونه است و چه هدف كلی از انجام تست الایزا داریم؟

ب) چه مواد و چه واكنشگرهایی در اختیار داریم و یا قادریم تهیه كنیم؟

روشهای مختلفی از آزمونهای الایزا طراحی شده و...

روشهای مختلفی از آزمونهای الایزا طراحی شده و بوفور در كیت‌های تشخیص پاتوژنها و در آزمایشهای تحقیقاتی مورد استفاده قرار می‌گیرند. این روشها در زیر مورد بررسی قرار می‌گیرند: (پلیت ، كونژوگة مناسب  و مادة رنگی مطلوب به سهولت توسط شركت‌های تجاری فراهم است.

3-3-1  الایزای مستقیم

3-3-1-1  الایزای مستقیم براساس جذب یا پوشش‌دهی آنتی‌ژن

مرحلة اول: پوشش‌دهی آنتی‌ژن بر روی پلیت‌ها

مرحلة دوم: شستشو

مرحلة سوم: افزودن كونژوگه (آنتی‌بادی اتصال یافته با آنزیم) و گذراندن زمان انكوباسیون

مرحلة چهارم: شستشو

مرحلة پنجم: افزودن سیستم رنگی

مرحلة ششم: قرائت پلیت با الایزاریدر

توضیح: در این نوع الایزا، آنتی‌ژنی كه به ته پلیت متصل می‌شود مستقیما با كونژوگه وارد واكنش می‌شود. این نوع روش الایزا، فقط در موارد مشخص استفاده   می‌ شود و آن موردی است كه می‌ خواهیم بدانیم كه كونژوگه ما برای انجام واكنش مناسب هست یا خیر. یعنی در اینجا آنتی‌ ژن  معمولا IgG می‌باشد. بنابراین راه اصلی سنجش واكنش یا عدم واكنش كونژوگه‌ای كه علیه یك آنتی‌بادی تهیه شده است ، این روش می‌باشد.

تیتر كونژوگه را نیز می‌توان با استفاده از این روش الایزا سنجید. امروزه برای سنجیدن واكنش مونوكلونال آنتی‌بادی كونژوگه شده با یك آنزیم كه برعلیه یك آنتی‌ژن خاص می‌باشد از این روش استفاده می‌كنند.

3-3-1-2  الایزای مستقیم براساس جذب یا پوشش‌دهی آنتی‌بادی

مرحلة اول: پوشش‌دهی آنتی بادی بر روی پلیت‌ها

مرحلة دوم: شستشو

مرحلة سوم: افزودن كونژوگه (آنتی‌بادی اتصال یافته با آنزیم) و گذراندن زمان انكوباسیون

مرحلة چهارم: شستشو

مرحلة پنجم: افزودن سیستم رنگی

مرحلة ششم: قرائت پلیت با الایزاریدر

توضیح: این نوع روش الایزا نیز فقط در موارد مشخصی استفاده می‌شود. كلا آنتی‌ژن در موارد بسیار معدودی كونژوگه می‌شود و استفاده از این روش بستگی به نوع كار تحقیقاتی دارد.

3-3-2  الایزای غیر مستقیم

مرحلة اول: پوشش‌دهی آنتی‌ژن

مرحلة دوم: شستشو

مرحلة سوم: افزودن آنتی‌بادی (علیه آنتی‌ژن پوشش داده شده) و گذراندن زمان انكوباسیون

مرحلة چهارم: شستشو

مرحلة پنجم: افزودن كونژوگه (آنتی‌بادی ثانویة همراه با آنزیم علیه آنتی‌بادی اولیه) و گذراندن زمان انكوباسیون

مرحلة ششم: شستشو

مرحلة هفتم: افزودن سیستم رنگی

مرحلة هشتم: قرائت پلیت با الایزاریدر

توضیج: این روش بسیار رایج می‌باشد و معمولا برای مشخص نمودن آنتی‌بادی علیه یك پاتوژن خاص یا علیه یك مادة خاص درون سرم از این روش استفاده می‌شود. "ویژگی" اندازه‌گیری بستگی به  خلوص آنتی‌ژنی  متصل شده به پلیت دارد. در این روش سرم ما می‌تواند حاوی آنتی‌بادی علیه آنتی‌ژن باشد (مثلا در افراد مبتلا به بیماری كه بدنشان علیه پروتئین‌های آنتی ژنی یک پاتوژن آنتی‌بادی ساخته است) و می‌تواند آنتی‌بادی علیه آن آنتی‌ژن نداشته باشد (افراد سالم). در این روش در مراحل اولیه و تنظیم تست الایزا، می‌توان سرم را با رقت‌های مختلف اضافه كرد (سرم را می‌توانیم با محلول رقیق كنندة سرم رقیق كنیم) و بهترین رقت را در تست‌های الایزای موازی كه فقط رقت سرم آنها متفاوت است بدست آورد. این روش در كیت‌های تجاری تشخیص بیماریها بوفور استفاده می‌شود. با استفاده از این روش تیتراسیون كونژوگه نیز انجام می‌شود.

3-3-3  الایزای ساندویچ

3-3-3-1  ساندویچ مستقیم

مرحلة اول: پوشش‌دهی آنتی‌بادی

مرحلة دوم: شستشو

مرحلة سوم: افزودن آنتی‌ژن و گذراندن زمان انكوباسیون

مرحلة چهارم: شستشو

مرحلة پنجم: افزودن آنتی‌بادی كونژوگه شده با آنزیم و گذراندن زمان انكوباسیون

مرحلة ششم: افزودن سیستم رنگی

مرحلة هفتم: قرائت پلیت توسط الایزاریدر

توضیح: دو آنتی‌بادی كه در این سیستم بكار می‌روند می‌توانند هر دو از یك گونه باشند و یا می‌توانند از گونه‌های متفاوتی از موجودات بدست آیند. گاهی اوقات به آنتی‌ژنی كه در این سیستم بكار می‌رود آنتی‌ژن تسخیر شده یا به دام افتاده می‌گویند. در این روش استفاده از محلولهای بلوكه كننده یا افزودن محلولهای بلوكه كننده به محلول پوشش‌دهی و محلولهای شستشو بسیار مهم است.

نكتة مهم در این روش آنست كه باید بدانیم كه آنتی‌ژن ما حداقل دو محل اتصال به آنتی‌بادی داشته باشد تا بتواند به این آنتی‌بادی‌ها متصل شود.

3-3-3-2  ساندویچ غیر مستقیم

مرحلة اول: پوشش‌دهی آنتی‌بادی

مرحلة دوم: شستشو

مرحلة سوم: افزودن آنتی‌ژن و گذراندن زمان انكوباسیون

مرحلة چهارم: شستشو

مرحلة پنجم: افزودن آنتی‌بادی علیه آنتی‌ژن

مرحلة ششم: شستشو

مرحلة هفتم: افزودن آنتی‌بادی سوم كونژوگه شده با آنزیم (علیه آنتی‌بادی دوم)

مرحلة هشتم: شستشو

مرحلة نهم: قرائت پلیت توسط الایزاریدر

توضیح: مشخص است كه آنتی‌بادی دوم  باید از یك گونة متفاوت از موجودات تهیه شود.

منبع : www.zhino86.blogfa.com





نوع مطلب :
برچسب ها :
لینک های مرتبط :
          
1390/02/4
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر





آمار وبلاگ
  • کل بازدید :
  • بازدید امروز :
  • بازدید دیروز :
  • بازدید این ماه :
  • بازدید ماه قبل :
  • تعداد نویسندگان :
  • تعداد کل پست ها :
  • آخرین بازدید :
  • آخرین بروز رسانی :
ابزار
Online User

چت



استخاره آنلاین با قرآن کریم

فال امروز

تعبیر خواب آنلاین

Google Pagerank, SEO tools
شبکه اجتماعی فارسی کلوب | Buy Website Traffic